隨著(zhù)科學(xué)技術(shù)不斷進(jìn)步的發(fā)展趨勢，醫學(xué)技術(shù)也在持續提高。 前兩年的冷凍人惡性事件讓人眼前一亮，原來(lái)不僅食材，身體也可以冷藏保存。假如要想做到那樣的目地，那麼就需要體細胞冷凍液，這類(lèi)東西如何配備呢?下邊就來(lái)實(shí)際的了解一下，細胞凍存液的秘方是啥？
細胞凍存液的配方是什么？
(一)細胞凍存
1. 配置含10%DMSO或凡士林、10～20%小牛血清的凍存細胞培養液;
2. 取對數成長(cháng)期的體細胞，除去舊細胞培養液，用PBS清理。
3. 除去PBS，添加適量蛋白酶(遮蓋細胞培養皿表層)把單面生長(cháng)發(fā)育的體細胞消化吸收出來(lái);
4. 抽濾1000rpm，5min;
5. 除去蛋白酶，添加適量配置好的凍存細胞培養液，用塑料吸管輕輕地吹打使體細胞勻稱(chēng)，記數，調整凍存液中體細胞的后相對密度為5牙周106/ml～1牙周107/ml;
6. 將體細胞分裝進(jìn)凍存管中，每管1～1.5 ml;
7. 在凍存管上標出體細胞的名字，凍存時(shí)間及作業(yè)者;
8. 凍存：標準的凍存程序流程為減溫速度-1～-2℃/min;當溫度達-25℃下列時(shí)，可升至-5℃～-10℃/min;到-100℃時(shí)，則可快速滲入液態(tài)氮中。也可將配有體細胞的凍存管放進(jìn)-20℃電冰箱2h，隨后放進(jìn)-70℃電冰箱中留宿，取下凍存管，移進(jìn)液氮容器內。
(二) 細胞復蘇
1. 從液氮容器中取下凍存管，立即滲入37℃溫開(kāi)水中，并時(shí)常搖晃令其盡早溶化。
2. 從37℃水浴中取下凍存管，開(kāi)啟外蓋，用塑料吸管吸出來(lái)體細胞懸液，加到離心管并滴加10倍以上細胞培養液，攪拌;
3. 抽濾， 1000rpm，5min;
4. 棄去上清液，添加含10%小牛血清細胞培養液重懸體細胞，記數，調節體細胞相對密度，打疫苗塑造瓶，37℃恒溫箱靜放塑造;
5. 隔日拆換一次細胞培養液，再次塑造。
常見(jiàn)問(wèn)題
1.從繁衍期到產(chǎn)生高密度的單層細胞之前的塑造體細胞都能夠用以?xún)龃?，但zui好是為多數成長(cháng)期體細胞。在凍存前一天*是換一次細胞培養液;
2.將凍存管放進(jìn)液氮容器或從這當中取下時(shí)，要搞好安全防護工作中，以防凍傷;
3.凍存和再生zui好用新配置的細胞培養液。
以上知識僅供參考，希望對您有所幫助！
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