ELISA試劑盒自從60-70年代問(wèn)世以來(lái),得到科研工作者的認可及推崇,在歐美及中國獲得很大的推廣,尤其是國內生化領(lǐng)域的長(cháng)足發(fā)展。在ELISA試劑盒實(shí)驗操作中,誤差分有系統誤差、偶然誤差、過(guò)失誤差,而一個(gè)小小的誤差主意能夠影響到實(shí)驗,很多人往往因為一個(gè)小細節,一個(gè)誤差沒(méi)能讓實(shí)驗成功。那么實(shí)驗誤差概率如何縮???除了需要細心之外,還有一些需要重點(diǎn)注意的地方。今天教您如何才能減少ELISA誤差:
1:檢驗技師應具備從事實(shí)驗室操作的基本素質(zhì)和實(shí)踐經(jīng)驗。能熟練操作實(shí)驗儀器、器械,具有一定總結和分析問(wèn)題的能力,對實(shí)驗中出現的意外情況能及時(shí)妥善解決。
2:使用校對過(guò)的微量移液器,排除自然誤差。移液器準確與否對定量檢測尤為重要。
3:仔細閱讀說(shuō)明書(shū),嚴格按照說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行規范化操作。不同批號的試劑不可混用。值得改進(jìn)的地方,反復試驗確定成立后才能改進(jìn)。
4:洗滌*,如若洗板不*,酶結合物本底顯色會(huì )呈現假陽(yáng)性。洗滌液要新鮮,現用現配,陳舊的洗滌液會(huì )出現本底增高現象,也可能出現假陽(yáng)性。
5:嚴控反應時(shí)間,反應時(shí)間過(guò)長(cháng),酶失活;反應時(shí)間過(guò)短,酶結合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結合,生成物結構松散不牢固,容易洗掉,都可能造成假陰性。
6:注意試劑盒保存期,過(guò)保存期的試劑不能使用。
7:評估試劑的實(shí)用性,試劑的穩定與否,對準確率的高低到頭重要。在試劑啟用前,應進(jìn)行陰、陽(yáng)對照及樣品反復比照試驗,判定試劑符合要求后方可使用。
8:嚴格掌握顯色時(shí)間,顯色時(shí)間過(guò)短,加入終止液反應終止后,底物結合物的量過(guò)少,易出現假陰性。超過(guò)顯色要求時(shí)間后顯色,應判為假陽(yáng)性,這可能與試劑本身有關(guān)。加顯色劑后立即顯色,不可報陽(yáng)性,這可能是本底顯色的結果。
9:加樣要準確、快速。如果加樣不準確,酶生成物的量不能確定,直接影響顯色結果。顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關(guān),所以加樣應慎重。要求在一定時(shí)間內加樣完畢的實(shí)驗,如果加樣遲緩,便出現誤差,而且試劑長(cháng)時(shí)間暴露在外,尤其室溫過(guò)高時(shí),保存期會(huì )縮短甚至失效。