轉染效率低？這份細胞轉染攻略，快收藏了吧！

從導入的核酸存在于宿主細胞的時(shí)間長(cháng)短，可將轉染分為瞬時(shí)轉染和穩定轉染。

瞬時(shí)轉染（transient transfection）：指將構建好的質(zhì)粒通過(guò)某種方式導入到哺乳動(dòng)物細胞內，該質(zhì)粒上的外源基因不整合到細胞自身的基因組上。瞬時(shí)轉染的基因表達是快速且短暫的，通常只能維持幾天。這種轉染方式主要用于快速檢測基因功能或蛋白質(zhì)表達，例如了解基因沉默、抑制性RNA和小規模蛋白質(zhì)生產(chǎn)等。

穩定轉染（Stable transfected）：將外源DNA整合到宿主細胞的基因組中，這種整合過(guò)程需要更長(cháng)時(shí)間和更復雜的操作。穩定轉染后的基因表達是長(cháng)期且穩定的，因為外源基因會(huì )被傳遞給子代細胞。這種轉染方式主要用于長(cháng)期表達目標基因的實(shí)驗，例如生產(chǎn)重組蛋白、進(jìn)行基因敲除或敲入等研究。穩定轉染也用于藥物篩選、研究形態(tài)變化、抗生素耐藥性等領(lǐng)域。

細胞轉染通?？煞譃槿?lèi)途徑分別為物理介導、化學(xué)介導和生物介導。

物理介導：電穿孔法、顯微注射和基因槍等

化學(xué)介導：如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉染方法和多種陽(yáng)離子物質(zhì)介導技術(shù)等

生物介導：病毒介導，逆轉錄病毒、腺病毒等

問(wèn)題來(lái)了，該怎么選擇合適的轉染方法呢？

小編對這三個(gè)途徑的常用方法進(jìn)行了總結，記得給小編點(diǎn)個(gè)收藏hahaha~

物理介導——電穿孔法

原理：電流能夠擊穿細胞膜形成瞬時(shí)的水通路或膜上小孔促使DNA分子進(jìn)入胞內。

優(yōu)點(diǎn)：原理簡(jiǎn)單；不需要載體。

缺點(diǎn)：需要特殊設備，電流對細胞傷害非常大。

化學(xué)介導——脂質(zhì)體轉染

原理：陽(yáng)離子脂質(zhì)體表面帶正電荷，與核酸的磷酸根通過(guò)靜電作用，將DNA分子進(jìn)行包裹，形成DNA脂復合物，能被表面帶負電的細胞膜吸附，再通過(guò)細胞內吞進(jìn)入細胞。

優(yōu)點(diǎn)：操作比較簡(jiǎn)單，轉染效率高。

缺點(diǎn)：需要進(jìn)行條件優(yōu)化；有些細胞體系不易轉染；對血清敏感；價(jià)格較高。

化學(xué)介導——陽(yáng)離子聚合物

原理：與脂質(zhì)體轉染原理相似，都是利用陽(yáng)離子與核酸結合成復合物，利用細胞內吞進(jìn)入細胞內。

優(yōu)點(diǎn)：在血清內穩定；對細胞毒性相對較低；轉染率高；性?xún)r(jià)比高。

缺點(diǎn)：需要對體系進(jìn)行條件優(yōu)化；有些細胞體系不易轉染。

生物介導——病毒感染

原理：通過(guò)侵染宿主細胞從而將外源基因導入到細胞中。

優(yōu)點(diǎn)：高轉染率；適用性廣。

缺點(diǎn)：需要對體系進(jìn)行條件優(yōu)化；需要構建病毒載體，步驟較為復雜。

然而，一種方法不會(huì )適用于所有的細胞和實(shí)驗，理想的轉染方法應該根據自己的細胞類(lèi)型和實(shí)驗需求來(lái)選擇。合適的細胞轉染方法應具有高轉染效率，低細胞毒性和對正常生理學(xué)的影響最小，且易于使用和可重復性等特點(diǎn)。

細胞轉染效率往往受到很多因素的影響，從細胞類(lèi)型、細胞培養條件和細胞生長(cháng)狀態(tài)，到轉染方法的操作細節，都需要考慮，所以細胞轉染是一個(gè)常規但并不簡(jiǎn)單的實(shí)驗。在進(jìn)行轉染實(shí)驗時(shí)，需要注意以下事項：

細胞狀態(tài)：確保細胞處于良好的生長(cháng)狀態(tài)，并在轉染前處于指數生長(cháng)期。

轉染試劑選擇：根據細胞類(lèi)型和實(shí)驗目的選擇適當的轉染試劑。

DNA/RNA質(zhì)量：使用高質(zhì)量的DNA或RNA，并確保其大小適宜。

轉染時(shí)間：根據細胞類(lèi)型和轉染試劑確定最佳的轉染時(shí)間。

健康細胞培養物和操作：保持細胞健康，避免RNA酶和其他污染源的污染。

純化RNA：在轉染前，使用適當的方法純化RNA，以去除多余的核苷酸、小的寡核苷酸、蛋白和鹽離子。

避免RNA酶污染：確保實(shí)驗環(huán)境中沒(méi)有RNA酶，防止對實(shí)驗結果產(chǎn)生影響。

重復實(shí)驗：為了確保實(shí)驗結果的可靠性和可重復性，需要進(jìn)行多次重復實(shí)驗。

轉染效率檢測：轉染完成后需要對轉染效率進(jìn)行檢測，對實(shí)驗數據進(jìn)行正確的分析和解釋?zhuān)苊庖蛘`判而得出錯誤的結論。

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