SFM_無(wú)血清培養基

培養基（Medium）是供微生物、植物和動(dòng)物組織生長(cháng)和維持用的人工配制的養料，一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無(wú)機鹽（包括微量元素）以及維生素和水等。有的培養基還含有抗菌素和色素。
　　無(wú)血清培養基（serum free medium,SFM）:是不需要添加血清就可以維持細胞在體外較長(cháng)時(shí)間生長(cháng)繁殖的合成培養基。但是它們可能包含個(gè)別蛋白或大量蛋白組分。雖然基礎培養基加少量血清所配制的*培養基可以滿(mǎn)足大部分細胞培養的要求，但對有些實(shí)驗卻不適合，如觀(guān)察一種生長(cháng)因子對某種細胞的作用，這時(shí)需要排除其他生長(cháng)因子的干擾作用。而血清中可能含有各種生長(cháng)因子；又如需要測定某種細胞在培養過(guò)程中分泌某種物質(zhì)（抗體、生長(cháng)因子）的能力；或者要大規模的培養某種細胞，以獲得它們的分泌產(chǎn)物。因此研制出無(wú)血清培養基一直是生物科學(xué)工作者努力的目標。上海恒利安生物科技有限公司已成功開(kāi)發(fā)了商業(yè)化的多種無(wú)血清培養基，可滿(mǎn)足眾多廠(chǎng)商的需求。

    無(wú)血清培養基和試劑被廣泛的應用于培養哺乳動(dòng)物和無(wú)脊動(dòng)物細胞以制備單克隆抗體，病毒抗原和重組蛋白等。大多數的無(wú)血清產(chǎn)品含有向細胞內轉運離子的轉鐵蛋白和調節葡萄糖攝取量的胰島素，以及一些蛋白質(zhì)如清蛋白，纖連蛋白，胎球蛋白等，這些蛋白在細胞培養中發(fā)揮各種不同功能，如吸附毒性化合物，抗生物反應器剪切力，提供細胞貼壁所需的基質(zhì)，作為脂類(lèi)和其他生長(cháng)因子的載體等。
　　一、無(wú)血清培養基的基本配方:基本成分為基礎培養基及添加組分兩大部分。
　　用于生物制藥和疫苗生產(chǎn)的細胞在體外培養時(shí)，多數呈貼壁生長(cháng)或兼性貼壁生長(cháng)；而當其在無(wú)血清、無(wú)蛋白培養基中生長(cháng)時(shí)，由于缺乏血清中的各種粘附貼壁因子如纖粘連蛋白、層粘連蛋白、膠原、玻表粘連蛋白，細胞往往以懸浮形式生長(cháng)。
　　添加組分包括以下幾大類(lèi)物質(zhì)：
　?。?）促貼壁物質(zhì)：許多細胞必須貼壁才能生長(cháng)，這種情況下無(wú)血清培養基中一定要添加促貼壁和擴展因子，一般為細胞外基質(zhì)，如纖連蛋白、層粘連蛋白等。它們還是重要的分裂素以及維持正常細胞功能的分化因子，對許多細胞的繁殖和分化，起著(zhù)重要作用。纖連蛋白主要促進(jìn)來(lái)自中胚層細胞的貼壁與分化，這些細胞包括成纖維細胞、肉瘤細胞、粒細胞、腎上皮細胞、腎上腺皮質(zhì)細胞、CHO細胞、成肌細胞等。
　?。?）促生長(cháng)因子及激素：針對不同細胞添加不同的生長(cháng)因子。激素也是刺激細胞生長(cháng)、維持細胞功能的重要物質(zhì)，有些激素是許多細胞*的，如胰島素。
　?。?）酶抑制劑：培養貼壁生長(cháng)的細胞，需要用胰酶消化傳代，在無(wú)血清培養基中*須含酶抑制劑，以終止酶的消化作用，達到保護細胞的目的。zui常用的是大豆胰酶；抑制劑。
　?。?）結合蛋白和轉運蛋白：常見(jiàn)如轉鐵蛋白和牛血清白蛋白。牛血清白蛋白的添加比較大，可增加培養基的粘度，保護細胞免受機械損傷。許多旋轉式培養的無(wú)血清培養基都含有牛血清白蛋白。
　?。?）微量元素：硒是zui常見(jiàn)的。 二、使用方法:目前，血清仍是動(dòng)物細胞培養中zui基本的的添加物，尤其是在原代培養或者細胞生長(cháng)狀況不良時(shí)，常常會(huì )先使用有血清的培養液進(jìn)行培養，待細胞生長(cháng)旺盛以后，再換成無(wú)血清培養液。細胞轉入無(wú)血清培養基培養要有一個(gè)適應過(guò)程，一般要逐步降低血清濃度，從10%減少到5%，3%，1%，直至無(wú)血清培養。在降低過(guò)程中要注意觀(guān)察細胞形態(tài)是否發(fā)生變化，是否有部分細胞死亡，存活細胞是否還保持原有的功能和生物學(xué)特性等。在實(shí)驗后這些細胞一般不再繼續保留，很少有細胞能夠長(cháng)期培養于無(wú)血清培養基而不發(fā)生改變的。細胞轉入無(wú)血清培養之前，要留有種子細胞，種子細胞按常規培養于含血清的培養基中，以保證細胞的特性不發(fā)生變化。
　　為了使細胞適應無(wú)血清培養，關(guān)鍵的是使所培養細胞：
　　●處于對數生長(cháng)中期
　　●>90% 活細胞率
　　●適應時(shí)以較高的起始細胞接種
　　有兩種方法使細胞適應無(wú)血清培養基（SFM）:
　　1. 直接適應——細胞從添加血清的培養基轉換到無(wú)血清培養基（SFM）中。
　　一些類(lèi)型細胞可直接從包含血清的培養基適應無(wú)血清培養基。對于直接適應，接種細胞密度應該:2.5×105~3.5×105細胞/ml。當細胞密度達到1×106~3×106細胞/ml時(shí)，傳代培養細胞。當細胞密度在培養4到7天后達到2×106~4×106細胞/ml時(shí)，細胞*適應了無(wú)血清培養基。每隔3~5天，當細胞密度達到1×106~3×106細胞/ml，細胞活率在90％時(shí)，貯備的適應了無(wú)血清培養基的細胞培養物應該再次傳代培養。
　　2. 連續適應——分好幾步把細胞從添加血清的培養基轉換到無(wú)血清培養基（SFM）中，與直接適應相比較，連續適應趨向對于細胞更加溫和一些。
　　●以2倍正常接種密度接種生長(cháng)活躍的細胞培養物到75%有血清培養基：25％SFM 混合培養基中，傳代培養。
　　●當細胞密度>5×105細胞/ml時(shí)，以2×105到3×105細胞/ml細胞密度，在有血清培養基：SFM為50∶50的混合培養基中傳代培養。
　　●以2×106到3×106細胞/ml細胞密度，25％有血清培養基和75% SFM中傳代培養。
　　●當細胞密度達到1×106到3×106細胞/ml（接種后4到6天），在100％SFM培養基中傳代培養。
　　●每隔3到5天，當細胞密度達到1×106到3×106細胞/ml，細胞活率在90％時(shí)，貯備的適應了無(wú)血清培養基的細胞培養物應該再次傳代培養。
　　建議備份前一次混合培養的培養物，直到每一次細胞適應了新的混合培養基。每一次減少血清前，可能需要在SFM/有血清混合培養基中進(jìn)行幾次傳代。
　　在適應過(guò)程中，不要讓細胞生長(cháng)過(guò)度。這將增加選擇亞群的可能性。需要注意，與有血清培養基相比，大部分SFM包含非常少的蛋白質(zhì)，因而更易于受外界因素的影響。
　　細胞培養適應替代血清：許多細胞利用連續適應方法能很好的適應，用包含FBS的的培養基和包含有替代血清的培養基1∶1（v∶v）的混合培養基培養細胞。通過(guò)下列的混合培養基的方式，連續幾代減少當前培養基的量：1∶2，1∶4，1∶16和100％替代培養基。每次適應改變血清比例時(shí)，傳代細胞2到3次。
　　培養可以直接從FBS轉換到替代血清。一開(kāi)始就使用相同于FBS的濃度的替代物或血清，生長(cháng)的延遲可能會(huì )發(fā)生，4允許進(jìn)行2到3次的傳代，使生長(cháng)率恢復到以前的水平。
　　特別需要強調的是：配制無(wú)血清培養液必須使用高質(zhì)量的水，如石英玻璃蒸餾器經(jīng)三次蒸餾或超純水凈化裝置制備的水。因為無(wú)血清培養基缺乏了血清中天然成分中和毒素、保護細胞的大分子，既便水中的有毒物質(zhì)含量甚微，也可能對細胞產(chǎn)生致死性損害。這是無(wú)血清培養能否成功的關(guān)鍵因素之一。
　　三、使用無(wú)血清培養基的優(yōu)點(diǎn)
　　●增加確定性
　　●性能更加一致
　　●容易進(jìn)行純化和下游加工
　　●細胞功能的評估
　　●增強生長(cháng)和/或產(chǎn)量
　　●生理反應性的較好對照
　　●增強細胞內中介物的檢測
無(wú)血清培養基種類(lèi)：
①UltraCULTURETM培養劑 
UltraCULTURE MEDIUM（Serum-free general purpose medium）

簡(jiǎn)介：一種通用的無(wú)血清培養劑
適用范圍：培養貼壁和懸浮哺乳動(dòng)物細胞，疫苗生產(chǎn)中病毒顆粒的制備
②PC-1TM培養基 
PC-1Complete Serum-free Medium 5
PC-1 Complete Serum-free Medium（powder plus supplement）
PC-1 Supplement （50）
簡(jiǎn)介：是一種低蛋白，無(wú)血清培養基。PC-1培養基旨在應用于各種研究和工業(yè)用途，使用限定成份配制的培養基確保在維持zui低蛋白成分同時(shí)使細胞獲得*的生長(cháng)狀態(tài)。
適用范圍：培養原代細胞和貼壁依賴(lài)性細胞
③UltraMEM Reduced Serum培養基
UltraMEM Reduced Serum Medium
（Low-protein medium containing L-glutamine &ITES） 
UltraMEM Reduced Serum Medium
（Protein-free basal medium without L-glutamine）
簡(jiǎn)介：用于支持多種貼壁信賴(lài)性細胞在低血清濃度下的正常生長(cháng)的限定培養基。
適用范圍：培養貼壁信賴(lài)性細胞
④UltraCHOTM培養基
UltraCHO Meidum（1*liquid with L-glutamine） 1L
UltraCHO Meidum（1*liquid without nucleosides） 500mL
UltraCHO Supplement（Non-sterile） 100ml
簡(jiǎn)介：培養基zui適于培養轉染和未轉染的中國倉鼠卵巢細胞（CHO）細胞，表達重姐蛋白質(zhì)。
適用范圍：培養CHO細胞; 重組蛋白的合成。
⑤UltraMDCKTM培養基
UltraMDCK Meida
簡(jiǎn)介：是一種無(wú)血清限定培養劑，適于高/低平板密度培養MADIN-DABBY犬腎細胞（MDCK）
適用范圍：培養供體外診斷（IVD）用的MDCK細胞
⑥Pro293TMCDM系統
PRO 293A-CDM 
1PRO 293S-CDM 
簡(jiǎn)介：用于293細胞（轉化的人胚腎細胞）培養Pro293限定培養基系統是專(zhuān)為促進(jìn)293細胞重組蛋白的合成和下游反應而開(kāi)發(fā)的。這些配方不需要任何動(dòng)物來(lái)源的成分即可支持高密度的培養
適用范圍：293細胞重組蛋白和合成
⑦Insect-XPRESSTM培養基
Insect-XPRESS Medium 
簡(jiǎn)介：采用一種無(wú)蛋白配方，適合培養來(lái)源于Spodoptera frugiperda（Sf9和Sf21）的昆蟲(chóng)細胞系。
適用范圍：桿狀病毒的增殖，重組蛋白的表達。
⑧HL-1TM*無(wú)血清培養基
HL-1 Complete Serum-free Medium（powder） 10L
簡(jiǎn)介：HL-1TM*無(wú)血清培養基是一種限定培養基，蛋白含量低于30ug/ml. HL-1TM*無(wú)血清培養基不含牛血清白蛋白和其它不明蛋白混合物。
適用范圍：雜交瘤細胞和淋巴細胞來(lái)源的分化細胞的無(wú)血清培養。
⑨UltraDOMATM培養基
BUltraDOMA Medium 500ml
簡(jiǎn)介：適用于中空纖維反應器中進(jìn)行中，鼠和嵌合雜交瘤細胞的培養及上述細胞的批量培養。
適用范圍：雜交瘤細胞的培養，單克隆抗體的制備。
⑩UltraDOMA-PFTM無(wú)蛋白培養基
UltraDOMA-P.F.Protein-free Medium 
簡(jiǎn)介：一種不含蛋白的培養基，適于鼠，人和嵌合細胞來(lái)源的雜交瘤細胞系的培養。
適用范圍：雜交瘤細胞和骨髓瘤細胞的培養，單克隆抗體的制備。
11. X-VIVO培養基
X-VIVO 10 
X-VIVO 10 with Gentamicin and Phenol Red 
X-VIVO 10 w/o Gentamicin and Phenol Red
簡(jiǎn)介：為了有助于在無(wú)血清環(huán)境中制備淋巴因子激活的殺傷細胞（LAK）而設計的。
X-VIVO 15
X-VIVO 15 with Gentamicin and Phenol Red
X-VIVO 15 w/o Gentamicin or Phenol Red
簡(jiǎn)介：在組成上和X-VIVO 10相似，并且經(jīng)過(guò)調整優(yōu)化使之適合于無(wú)血清條件下腫瘤浸潤淋巴細胞（TIL）的增殖，其配方有助于外周學(xué)及人類(lèi)腫瘤中分離純化的CD3+細胞的增殖。同時(shí)還用于維持人類(lèi)單核細胞、巨噬細胞及細胞系、粒細胞和自然殺傷細胞（NK）的生長(cháng)。
X-VIVO 20
X-VIVO 20 with Gentamicin and Phenol Red, 1 L
簡(jiǎn)介：經(jīng)過(guò)改進(jìn)和優(yōu)化有助于單核細胞耗竭的高密度的外周淋巴細胞制備LAK細胞。
存儲條件：2℃-8℃
三種培養的部分細胞類(lèi)型應用如下：
人和鼠淋巴因子激活殺傷細胞（LAK）；外周血淋巴細胞（PBL）；人和鼠腫瘤浸潤淋巴細胞（TIL）；人T細胞；人和鼠巨噬細胞；人和鼠造血干細胞（克隆形成和增殖）；人體組織的冰凍保存。
X-VIVO 產(chǎn)品的其他應用包括：
PBL的增殖；TIL的增殖；器官的冰凍保存和移植；人單核細胞和巨噬細胞的培養；干細胞的培養；樹(shù)突狀細胞的培養。 

人間充質(zhì)干細胞無(wú)血清培養基 相關(guān)操作：

人間充質(zhì)干細胞復蘇

1.把人間充質(zhì)干細胞培養基放入37°C水浴中預熱；
2.從液氮中取出間充質(zhì)干細胞迅速放入37°C水浴快速解凍（解凍后不要繼續孵育細胞）；
3.在超凈臺中加入5ml的人間充質(zhì)干細胞培養基重懸細胞，1000rpm離心5min；
4.棄上清,加入5ml的人間充質(zhì)干細胞*培養基重懸細胞，轉移到T-25細胞培養瓶中（帶濾芯）；
5.將培養瓶置于37℃，5% CO2的無(wú)菌培養箱中培養；

6.第二天，用新鮮的人間充質(zhì)干細胞*培養基給細胞換液。