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細胞培養基中的渾濁是怎么回事?

更新時(shí)間:2021-09-27

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   細胞培養基是人工模擬細胞在體內生長(cháng)的營(yíng)養環(huán)境,是提供細胞營(yíng)養和促進(jìn)細胞生長(cháng)增殖的物質(zhì)基礎。培養液或培養基的含義幾乎相同,英文都是medium。當它是粉劑時(shí),傾向性地稱(chēng)為培養基,而將粉劑配成液體后,多稱(chēng)為培養液。培養液中常常補加血清、抗生素等成分。培養基主要包括天然細胞培養基、合成細胞培養基和無(wú)血清細胞培養基等。那么細胞培養基中的渾濁,究竟是什么?
  如果排除了污染,細胞培養基中的渾濁通常被解釋為金屬、蛋白和其他培養基組分的沉淀。沉淀物可能損害細胞健康,因為它們通過(guò)螯合可移除養分和其他需要的組分,從而改變培養基的組成。沉淀物也是顯微鏡可見(jiàn)的,可能會(huì )干擾依賴(lài)成像的實(shí)驗分析。
  產(chǎn)生沉淀的可能原因
  一、溫度變化
  在細胞培養中,溫度是引起沉淀的主要因素之一。當遭遇溫度的變化時(shí),高分子量血漿蛋白會(huì )從溶液中析出;熱失活和凍融循環(huán)能促進(jìn)蛋白降解和沉淀;因為液體或重組成培養基在使用之間保持冷藏儲存,鹽可能沉淀,尤其是10x或其他濃縮的儲存液。
  二、失水誘導的濃度改變
  如果培養基可能蒸發(fā),培養基組分(包括鹽) 的濃度將會(huì )增加,特別是培養基表面可能容易形成晶體沉淀。
  三、鈣鹽
  制備無(wú)血清培養基時(shí),組分添加的順序可能導致不可溶分子的形成。鈣鹽尤其容易沉淀,比如CaCl2和MgSO4在溶液中反應產(chǎn)生CaSO4晶體。高壓滅菌和pH值不穩定會(huì )加劇這一問(wèn)題。
  四、金屬補充物
  銅、鐵和鋅等金屬離子是細胞生長(cháng)所必需的,是無(wú)血清培養基的重要補充物。培養系統中其他血清組分的缺失可能導致這些金屬沉淀,為細胞形成有毒的環(huán)境。在較高pH環(huán)境下(一般>8時(shí)),碳酸鹽和氫氧根離子與銅離子、磷酸鹽和氫氧根離子與鐵離子、碳酸鹽、磷酸鹽和氫氧根離子與鋅離子、氫氧根離子與鎂離子易形成不溶性沉淀物;在氧化條件下,銅和鋅更易于沉淀。
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