Beyotime 細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒

產(chǎn)品名稱(chēng)：Beyotime 細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒

產(chǎn)品貨號：C1052

產(chǎn)品規格：50次/kit

產(chǎn)品介紹：

碧云天生產(chǎn)的細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒(Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit)是一種采用經(jīng)典的碘化丙啶染色(Propidium staining，即PI staining)方法進(jìn)行細胞周期與細胞凋亡分析的檢測試劑盒。

碘化丙啶(Propidium，簡(jiǎn)稱(chēng)PI)是一種雙鏈DNA的熒光染料。碘化丙啶和雙鏈DNA結合后可以產(chǎn)生熒光，并且熒光強度和雙鏈DNA的含量成正比。細胞內的DNA被碘化丙啶染色后，可以用流式細胞儀對細胞進(jìn)行DNA含量測定，然后根據DNA含量的分布情況，可以進(jìn)行細胞周期和細胞凋亡分析。

碘化丙啶染色后，假設G0/G1期細胞的熒光強度為1，那么含有雙份基因組DNA的G2/M期細胞的熒光強度的理論值為2，正在進(jìn)行DNA復制的S期細胞的熒光強度為1-2之間。凋亡細胞由于細胞核發(fā)生濃縮以及發(fā)生DNA段化(DNA fragmentation)導致部分基因組DNA在染色過(guò)程中丟失，因此凋亡細胞碘化丙啶染色后呈現明顯的弱染，即熒光強度小于1，在流式檢測的熒光圖上出現所謂的sub-G1峰，即凋亡細胞峰。

細胞發(fā)生凋亡時(shí)，由于胞漿和染色質(zhì)濃縮、核碎裂，產(chǎn)生凋亡小體，使細胞的光散射性質(zhì)發(fā)生變化。在細胞凋亡的早期，細胞對前向角光散射的能力顯著(zhù)降低，對側向光散射的能力增加或沒(méi)有變化。在細胞凋亡的晚期，前向和側向光散射的信號均降低。因此可通過(guò)流式細胞儀測定細胞光散射的變化觀(guān)察細胞凋亡情況。

本試劑盒通常應用于培養的貼壁或懸浮細胞的細胞周期與細胞凋亡檢測。如果用于組織的細胞周期與細胞凋亡檢測，則必須把組織消化成單細胞狀態(tài)，才可以進(jìn)行檢測。

本試劑盒足夠檢測50個(gè)樣品，每個(gè)樣品的細胞數量可以為10-100萬(wàn)。

產(chǎn)品組分：

染色緩沖液25ml

碘化丙啶染色液(20X)1.25ml

RNase A(50X)0.5ml

說(shuō)明書(shū)1份

產(chǎn)品使用說(shuō)明：

使用說(shuō)明：

1. 細胞樣品的準備：

a. 對于貼壁細胞：小心收集細胞培養液到一離心管內備用。用胰酶消化細胞，至細胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來(lái)時(shí)，加入前面收集的細胞培養液，吹打下所有的貼壁細胞，并輕輕吹散細胞。再次收集到離心管內。1000g左右離心3-5分鐘，沉淀細胞。對于特定的細胞，如果細胞沉淀不充分，可以適當延長(cháng)離心時(shí)間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50微升左右的培養液，以避免吸走細胞。加入約1毫升冰浴預冷的PBS，重懸細胞，并轉移到1.5毫升離心管內。再次離心沉淀細胞，小心吸除上清，可以殘留約50微升左右的PBS，以避免吸走細胞。輕輕彈擊離心管底以適當分散細胞，避免細胞成團。

b. 對于懸浮細胞：1000g左右離心3-5分鐘，沉淀細胞。對于特定的細胞，如果細胞沉淀不充分，可以適當延長(cháng)離心時(shí)間或稍稍

加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50微升左右的培養液，以避免吸走細胞。加入約1毫升冰浴預冷的PBS，重懸細胞，并轉移到1.5毫升離心管內。再次離心沉淀細胞，小心吸除上清，可以殘留約50微升左右的PBS，以避免吸走細胞。輕輕彈擊離心管底以適當分散細胞，避免細胞成團。

2. 細胞固定：加入1毫升冰浴預冷70%乙醇中，輕輕吹打混勻，4℃固定30分鐘或更長(cháng)時(shí)間。通常固定2小時(shí)或以上更能保證染色效果，固定12-24小時(shí)可能效果更佳。1000g左右離心3-5分鐘，沉淀細胞。對于特定的細胞，如果細胞沉淀不充分，可以適當延長(cháng)離心時(shí)間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50微升左右的70%乙醇，以避免吸走細胞。加入約1毫升冰浴預冷的PBS，重懸細胞。再次離心沉淀細胞，小心吸除上清，可以殘留約50微升左右的PBS，以避免吸走細胞。輕輕彈擊離心管底以適當分散細胞，避免細胞成團。

3. 碘化丙啶染色液的配制

4. 染色：每管細胞樣品中加入0.5毫升碘化丙啶染色液，緩慢并充分重懸細胞沉淀，37℃避光溫浴30分鐘。隨后可以4℃或冰浴避光存放。染色完成后宜在24小時(shí)內完成流式檢測，最好能在當日完成流式檢測。

5. 流式檢測和分析：用流式細胞儀在激發(fā)波長(cháng)488nm波長(cháng)處檢測紅色熒光，同時(shí)檢測光散射情況。采用適當分析軟件進(jìn)行細胞

DNA含量分析和光散射分析。

儲存與運輸：

-20℃保存，一年有效。C1052-2碘化丙啶染色液(20X)需避光保存。本試劑盒可4℃保存，一個(gè)月內有效

產(chǎn)品訂購信息：

品牌             貨號                   名稱(chēng)                                             規格

Beyotime   C1052    細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒             50次/kit

產(chǎn)品名稱(chēng)：Beyotime 細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒

產(chǎn)品貨號：C1052

關(guān)于公司：

Beyotime創(chuàng )辦于2001年。近20年來(lái)專(zhuān)注于自主研發(fā)和生產(chǎn)。2007年成立上海碧云天生物技術(shù)有限公司，為專(zhuān)精特新“小巨人"企業(yè)，并進(jìn)一步入選第二批第一年建議支持的專(zhuān)精特新“小巨人"企業(yè)， 也是G60科創(chuàng )走廊一類(lèi)重點(diǎn)扶持企業(yè)和上海市專(zhuān)精特新中小企業(yè)。江蘇碧云天為江蘇省優(yōu)良企業(yè)，南通市雙創(chuàng )優(yōu)企。公司主要研發(fā)生產(chǎn)生物、醫學(xué)研究用試劑、試劑盒、消耗品和儀器設備。

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