血清在細胞培養中常見(jiàn)問(wèn)題

? 正常情況下，融化后血清的外觀(guān)顏色應該是？
血清為動(dòng)物來(lái)源，成分復雜，不同批次間會(huì )存在一些外觀(guān)上的差別。一般情況下，它們的顏色可能是金黃色、紅色、琥珀棕色或者是介于三者之間。

? 血清應如何保存？
未拆封的血清應存放于-15至-20℃，避免反復凍融。拆封后的血清應無(wú)菌分裝成一次的用量并存放于-15至-20℃，在產(chǎn)品質(zhì)量證書(shū)標識的效期內均可使用。2-8℃溶解后建議盡快使用。

? 血清的有效期是多久？
大部分康寧血清效期是5年，針對每個(gè)批次，請通過(guò)質(zhì)檢文件確定具體效期日期。


? 血清應如何融解？
從冰箱中取出血清，放于2-8℃融化，融化過(guò)程中不時(shí)旋轉（swirling mix）混勻。充分融解后分裝或平衡到室溫后使用

? 為什么有時(shí)血清中出現絮狀沉淀？是否需要去除？如何去除？
多種原因可能導致絮狀沉淀的形成，最常見(jiàn)的原因之一是融化過(guò)程中，脂蛋白聚集所致。該現象一般不會(huì )影響產(chǎn)品質(zhì)量?？梢?00g離心5分鐘，取上清，然后過(guò)濾。根據需要選擇合適的濾膜孔徑，一般的是0.22um PES材質(zhì)的濾膜。為避免濾膜阻塞，建議離心后取上清加入培養基內一起過(guò)濾而不是直接過(guò)濾血清。

? 為什么存放于冰箱中的血清會(huì )出現沉淀？如何避免該現象？
在2-8°C條件下存放，血清中的多種蛋白或脂蛋白會(huì )形成肉眼可見(jiàn)的沉淀，如血纖蛋白（fibrin），單體時(shí)處于溶解狀態(tài)，在凍融過(guò)程中會(huì )發(fā)生聚集，形成肉眼可見(jiàn)的沉淀。但該現象一般不會(huì )影響血清的性能?？梢?00g離心5分鐘，取上清，然后過(guò)濾。根據需要選擇合適的濾膜孔徑，一般的是0.22um PES材質(zhì)的濾膜。為避免濾膜阻塞，建議離心后取上清加入培養基內一起過(guò)濾而不是直接過(guò)濾血清。為盡量避免出現上述現象，建議血清分裝成一次性用量存于-15°至-20℃冰箱，避免反復凍融和融化后的血清在2-8°C條件下長(cháng)時(shí)間放置。

? 血清是否需要做滅活處理？
這取決于您的應用。
滅活過(guò)程中，會(huì )導致血清中某些成分被破壞，如氨基酸，維生素，生長(cháng)因子等。所以只有在您的實(shí)驗對血清有特殊要求時(shí)，才會(huì )考慮對血清進(jìn)行滅活處理。如您的實(shí)驗對血清中的某種組分敏感，需要去除該組分。最常見(jiàn)的情況是需要去除血清中的補體蛋白，因為補體在機體中參與細胞殺傷，巨噬細胞和淋巴細胞活化，肥大細胞和血小板組胺釋放，平滑肌收縮等過(guò)程，所以一般在免疫學(xué)相關(guān)研究中及肌細胞和干細胞的培養過(guò)程中需要對血清進(jìn)行滅活處理。

? 如何進(jìn)行血清滅活處理？
血清請先按上述“血清應如何融解”中的操作步驟融化和混勻，熱滅活時(shí)請將血清置于56℃水浴30分鐘。為盡量減少熱滅活對血清品質(zhì)的影響，一次滅活的血清體積不宜過(guò)大。最好準備同樣的容器裝相等體積的水（與血清相同溫度），滅活時(shí)將裝有血清和水的容器同時(shí)放入56℃水浴, 在裝水的容器中放置溫度計，加熱過(guò)程中不時(shí)輕輕旋轉混勻血清，當溫度計顯示達到56℃左右，開(kāi)始計時(shí)。56 ℃水浴后，建議馬上轉移到冰上降溫。

? 為什么需要對血清進(jìn)行g(shù)amma射線(xiàn)輻照？
gamma 射線(xiàn)輻照的目的是滅活血清中的病毒，一般情況下，25-40kGy和30-45kGy是常用的輻射劑量。


? 什么情況下需要無(wú)Ca2+/Mg2+離子的PBS？
取決于您的研究應用。除了一些Ca2+/Mg2+會(huì )影響實(shí)驗結果的實(shí)驗以外，一般在胰酶消化前，建議用無(wú)Ca2+/Mg2+離子的PBS清洗細胞，因為Ca2+/Mg2+會(huì )抑制胰酶活性。若消化后的貼壁細胞需要繼續培養，建議消化后用含Ca2+/Mg 2+的PBS清洗，因為Ca2+/Mg2+有助于細胞的貼壁過(guò)程。另外，若需要在緩沖液中長(cháng)時(shí)間保存細胞，也推薦使用含Ca2+/Mg2+的PBS。

? 康寧無(wú)Ca2+/Mg2+離子的PBS和DPBS的區別是什么？
取決于您的研究應用。除了一些Ca2+/Mg2+會(huì )影響實(shí)驗結果的實(shí)驗以外，一般在胰酶消化前，建議用無(wú)Ca2+/Mg2+離子的PBS清洗細胞，因為Ca2+/Mg2+會(huì )抑制胰酶活性。若消化后的貼壁細胞需要繼續培養，建議消化后用含Ca2+/Mg2+的PBS清洗，因為Ca2+/Mg2+有助于細胞的貼壁過(guò)程。另外，若需要在緩沖液中長(cháng)時(shí)間保存細胞，也推薦使用含Ca2+/Mg2+的PBS。

? 康寧是否有注射級別（WFI）的水？
康寧細胞培養用水按照USP和/或EP 中對注射用水（WFI）的無(wú)菌要求進(jìn)行質(zhì)控，但康寧的該類(lèi)產(chǎn)品為科研用產(chǎn)品，非臨床注射用水。

? 用于消化的胰酶中加EDTA的原因是什么？
鈣離子會(huì )抑制胰酶活性，EDTA作為鈣離子螯合劑，可以去除鈣離子，有助于胰酶更好發(fā)揮消化細胞的功能

? 為什么在使用胰酶前要先清洗貼壁細胞？
目前大部分情況下，細胞培養液中都含有一定量血清。血清中含有抑制胰酶活性的成分，如α1-antitrypsin 和α2-macroglobulin。建議使用無(wú)鈣鎂離子的緩沖液清洗細胞。