關(guān)于新藥研發(fā)中 宿主細胞蛋白 那些事

宿主細胞是生產(chǎn)諸如重組蛋白、抗體和疫苗類(lèi)藥物的上游材料，不同用途的藥物會(huì )采用不同的宿主細胞，重組蛋白類(lèi)藥物常用的細胞有中國倉鼠卵巢細胞（CHO），新型疫苗常采用非洲綠猴腎細胞（Vero）、犬腎細胞 （MDCK）、昆蟲(chóng)細胞、人二倍體細胞，傳統疫苗還會(huì )采用大腸桿菌、雞胚等作為宿主細胞。

宿主細胞蛋白如果殘留在藥物制劑中，會(huì )引起人體的免疫應答——過(guò)敏反應，如：發(fā)熱、水腫，甚至休克等。人體的免疫應答性質(zhì)和效果，會(huì )受到HCPs的濃度、數量和個(gè)體免疫系統差異影響而不同。藥物監管部門(mén)最關(guān)注患者用藥的安全性，所以HCPs的監控變得越來(lái)越重要。作為藥企來(lái)說(shuō)，藥物研發(fā)周期很長(cháng)，成功率也很低，投入和產(chǎn)出不是直接劃等號的，因此在藥品研發(fā)的中后期，藥企也會(huì )非常關(guān)注生產(chǎn)工藝設計過(guò)程中HCPs的控制。因為，藥物中HCPs殘留量會(huì )影響臨床試驗效果，國外曾有報道，由于藥企開(kāi)發(fā)的新藥在臨床實(shí)驗中出現免疫反應，導致臨床實(shí)驗推遲、擱置或重新設計工藝，如：易普森公司，凝血因子9(IB1001) 臨床實(shí)驗在2012年被擱置，2017才獲批。

藥品即使被成功開(kāi)發(fā)，但如果想進(jìn)入不同國家的市場(chǎng)，還要達到當地藥物監管部門(mén)的標準，所以藥企都會(huì )遵照不同國家藥典要求，嚴格建立HCP監控體系。中華人民共和國藥典2010年版第三部就明確規定CHO細胞殘余蛋白占總蛋白含量要小于0.05%以下；對Vero細胞殘余蛋白會(huì )隨不同產(chǎn)品而異，ELISA方法檢測法每個(gè)劑量不高于2微克或4微克。美國FDA認為可以接受的范圍為1-100/100萬(wàn)，即1-100個(gè)PPM。

當前，廣泛被使用于HCP檢測的方法是雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA）。在藥物研發(fā)中，通常會(huì )建立通用和專(zhuān)屬的HCP ELISA方法。前期可以采用通用HCP ELISA試劑盒。到臨床實(shí)驗時(shí)，藥企會(huì )采用專(zhuān)屬試劑盒，即工藝特異HCP ELISA試劑盒，需要單獨純化HCP蛋白，免疫篩選抗體。

HCP ELISA的原理是先將HCP抗體包被酶標板，孵育待測樣品，通過(guò)HCP抗體捕獲和富集樣品中HCPs，再加入與包被酶標板的抗體種屬不同的，酶聯(lián)報告基團的HCP抗體，結合已被富集的HCPs，通過(guò)底物顯色或熒光的方式成像，最終定量計算HCPs。

HCP ELISA的方法具有特異性強、靈敏度高、通量大和使用方便等特點(diǎn)，但也存在風(fēng)險：

ELISA方法能夠富集的HCPs至少要具有兩個(gè)及以上的表位。

當兩個(gè)表位被抗體結合時(shí)，不能存在空間位阻。

ELISA酶標板包被的抗體結合量低，會(huì )限制HCP檢出限。

不是所有HCPs都可以作為抗原產(chǎn)生抗體，因此會(huì )有“漏檢”，所以需要評估HCP ELISA抗體的覆蓋率（Coverage）。

Cygnus HCP測定法被用作行業(yè)的參考方法，或支持商業(yè)化生物制劑的制造和質(zhì)量控制（QC），因此其質(zhì)量聲譽(yù)享譽(yù)業(yè)界和監管機構。

各種細胞系用于生產(chǎn)治療性單克隆抗體和重組蛋白，下一代重組疫苗以及用于細胞和基因療法的病毒載體。Cygnus為幾乎所有表達平臺提供HCP ELISA。BHK HCP ELISA，HEK293 HCP ELISA，PER.C6 ® HCP ELISA，非洲綠猴腎細胞HCP ELISA，將HeLa HCP ELISA，CHO HCP ELISA 3G，NS / 0 HCP ELISA，SP2 / 0 HCP ELISA，大腸桿菌HCP ELISA，巴斯德畢赤酵母HCP ELISA和其他細胞系HCP ELISA用于治療性單克隆抗體和重組蛋白生產(chǎn)的過(guò)程開(kāi)發(fā)和最終產(chǎn)品質(zhì)量控制。