細胞培養基的5個(gè)基本要求

　　細胞培養基的5個(gè)基本要求：

　　體外培養的細胞直接生活在培養基中，因此培養基應能滿(mǎn)足細胞對營(yíng)養成分、促生長(cháng)因子、激素、滲透壓、pH等諸多方面的要求。

　　1、營(yíng)養成分。

　　維持細胞生長(cháng)的營(yíng)養條件一般包括以下幾個(gè)方面：

　　1）氨基酸：是細胞合成蛋白質(zhì)的原料。所有細胞都需要12種必須氨基酸：纈氨酸、亮、異亮、蘇、賴(lài)、色、苯丙、蛋、組、酪、精氨酸、胱氨酸。此外還需要谷氨酰胺，它在細胞代謝過(guò)程中有重要作用，所含的氮是核酸中嘌令和嘧啶合成的來(lái)源，同樣也是合成三、二、一磷酸酰苷所需要的基本物質(zhì)。

　　體外培養的各種培養基內都含有必需氨基酸。

　　2）單糖：培養中的細胞可以進(jìn)行有氧與無(wú)氧酵解，六碳糖是主要能源。此外六碳糖也是合成某些氨基酸、脂肪、核酸的原料。細胞對葡萄糖的吸收能力，半乳糖。

　　體外培養動(dòng)物細胞時(shí)，幾乎所有的培養基或培養液中都以葡萄糖作為必含的能源物質(zhì)。

　　3）維生素：主要扮演輔酶、輔基的角色，*。生物素、葉酸、煙酰胺、泛酸、吡哆醇、核黃素、硫胺素、維生素B12都是培養基常有的成分。

　　4）無(wú)機離子與微量元素：細胞生長(cháng)除需要鈉、鉀、鈣、鎂、氮和磷等基本元素，還需要微量元素，如鐵、鋅、硒、銅、錳、鉬、釩等。

　　2、促生長(cháng)因子及激素。

　　各種激素、生長(cháng)因子對于維持細胞的功能、保持細胞的狀態(tài)（分化或未分化）具有十分重要的作用。有些激素對許多細胞生長(cháng)有促生長(cháng)作用，如胰島素，它能促進(jìn)細胞利用葡萄糖和氨基酸。有些激素對某一類(lèi)細胞有明顯促進(jìn)作用，如可促進(jìn)表皮細胞的生長(cháng)，泌乳素有促進(jìn)乳腺上皮細胞生長(cháng)作用等。

　　3、滲透壓。

　　細胞必須生活在等滲環(huán)境中，大多數培養細胞對滲透壓有一定耐受性。人血漿滲透壓290mOsm/kg, 可視為培養人體細胞的理想滲透壓。鼠細胞滲透壓在320mOsm/kg左右。對于大多數哺乳動(dòng)物細胞，滲透壓在260－320mOsm/kg的范圍都適宜。

　　4、無(wú)毒、無(wú)污染。

　　體外生長(cháng)的細胞對微生物及一些有害有毒物質(zhì)沒(méi)有抵抗能力，因此培養基應達到無(wú)化學(xué)物質(zhì)污染、無(wú)微生物污染（如細菌、真菌、支原體、病毒等）、無(wú)其他對細胞產(chǎn)生損傷作用的生物活性物質(zhì)污染（如抗體、補體）。對于天然培養基，污染主要來(lái)源于取材過(guò)程及生物材料本身，應當嚴格選材，嚴格操作。對于合成培養基，污染主要來(lái)源于配制過(guò)程，配制所用的水，器皿應十分潔凈，配制后應嚴格過(guò)濾除菌。

　　5、pH。

　　氣體也是細胞生存的必需條件之一，所需氣體豐要是氧和二氧化碳。氧參與三羧酸循環(huán)，產(chǎn)生能量供給細胞生長(cháng)、增殖和合成各種成分。一些細胞在缺氧情況下，借糖酵解也可獲取能量，但多數細胞缺氧不能生存。在開(kāi)放培養時(shí)，一般置細胞于95％空氣加5％二氧化碳的混合氣體環(huán)境中培養。二氧化碳既是細胞代謝產(chǎn)物，也是細胞所需成分，它主要與維持培養基的pH有直接關(guān)系。動(dòng)物細胞大多數需要輕微的堿性條件，pH值約在7．2~7．4℃在細胞生長(cháng)過(guò)程中，隨細胞數量的增多和代謝活動(dòng)的加強，二氧化碳不斷被釋放，培養液變酸，PH值發(fā)生變化。由于NaHCO3容易分解為二氧化碳，很不穩定，致使緩沖系統難以地控制。故這一緩沖系統適合密閉培養。HEPES結合碳酸氫鈉使用，可提供更有效的緩沖體系，主要是防止pH值迅速變動(dòng)，但大缺點(diǎn)是在開(kāi)放培養或觀(guān)察時(shí)難以維持正常的pH值。造成pH波動(dòng)主要是代謝產(chǎn)生的CO2，在封閉式培養過(guò)程中CO2與水結合產(chǎn)生碳酸，培養基pH很快下降。為解決這一問(wèn)題，合成培養基中使用了NaHCO3-CO2緩沖系統，并采用開(kāi)放培養，使細胞代謝產(chǎn)生的CO2及時(shí)溢出培養瓶，再通過(guò)穩定調節溫箱中CO2濃度（5％），與培養基中的NaHCO3處于平衡狀態(tài)。