蛋白樣品制備詳解—雜質(zhì)去除篇

蛋白樣品制備中，在細胞破碎之后，既可以利用特定蛋白質(zhì)的特性來(lái)分離某一類(lèi)蛋白質(zhì)，比如親和純化，比如前面介紹的磷酸化蛋白富集，或者膜蛋白富集；另外一個(gè)考慮方向是去除雜質(zhì)----去掉樣品中某些非目標高豐度蛋白或者雜質(zhì)的干擾，同樣可以達到簡(jiǎn)化樣本的目的。當然要小心“倒洗腳水的時(shí)候別把嬰兒也倒掉了"，一定要選擇可靠的產(chǎn)品。

比如，潛在疾病標志物的最好樣本來(lái)源就是血清或其他體液，此類(lèi)樣本可以提供人蛋白質(zhì)組中絕大部分組份。然而用蛋白質(zhì)組分析方法鑒定疾病標志物最大的挑戰來(lái)自于血清中大量的高豐度蛋白對檢測的干擾，血清中有大約55%的蛋白為白蛋白，而IgG大約占血清中蛋白總量的10-25%，這些高豐度蛋白的存在會(huì )增加低豐度蛋白檢測的難度，去除占血清總蛋白近75%的白蛋白和IgG將有助于更好地鑒定其他的蛋白。G-Biosciences的AlbuminOUT™白蛋白去除試劑盒堪稱(chēng)白蛋白去除神器。血漿和腦脊髓液等樣本中，包含大量的白蛋白，從而封閉掉在二維凝膠電泳中發(fā)現和鑒定其他低豐度蛋白的可能。AlbuminOUT™白蛋白去除試劑盒被設計用來(lái)在這種樣本中大量去除白蛋白。

這種白蛋白去除方法是基于白蛋白和Cibachron藍色染料的結合。AlbuminOUT™被優(yōu)化從樣本中去除人的白蛋白。AlbuminOUT™使用快速離心柱方法，每個(gè)柱子含有0.2ml的染料結合樹(shù)脂，從而可以結合大于2mg的人白蛋白。AlbuminOUT™可以從5-50微升人血漿中去除大于98%的白蛋白。

離心柱形式可以在10分鐘內去除白蛋白。高結合力的藍色染料結合樹(shù)脂可以從人，豬，羊，狗，兔，大鼠和牛樣本中達到瞬間的結合和去除白蛋白。AlbuminOUT™或許也可以從其他物種中去除白蛋白。適用于處理25或50個(gè)樣本

Figure 1:  2D  analysis  of  whole  human  serum  before  (left)  and  after (right) treatment with AlbminOUT^™.

產(chǎn)品特點(diǎn)：

l 從樣本中不到10分鐘的時(shí)間內去除白蛋白

l 基于白蛋白和Cibachron藍色染料的結合

l 每個(gè)柱子的結合力大于2mg的人白蛋白

l 從5-50微升人血漿中去除大于98%的白蛋白

去垢劑如SDS、Tween、Tritonde等是蛋白樣品處理過(guò)程中常用的組分。去污劑在蛋白提取和樣本制備過(guò)程中是很重要的物質(zhì)，特別是研究疏水蛋白時(shí)。蛋白樣本中高濃度去污劑的存在能夠影響ELISA,IEF和蛋白的蛋白酶消化，以及用質(zhì)譜進(jìn)行分析時(shí)抑制肽的離子化。

所謂請神容易送神難。要除掉這些去垢劑？G-Biosciences推出的DetergentOUT™ GB-S10去污劑去除柱子和樹(shù)脂專(zhuān)門(mén)設計用來(lái)除于蛋白或其他生物樣本中所含有的去污劑，樹(shù)脂能夠從蛋白水溶液和肽樣本中去除自由的，未結合的陰離子的，非離子或兩性離子的去污劑(e.g. SDS, Triton® X-100 或CHAPS)，同時(shí)對于下游進(jìn)行的質(zhì)譜或其他技術(shù)的分析應用帶來(lái)最小的樣本丟失。

DetergentOUT™ GB-S10柱子在第三方的研究使用中表明*兼容DI-QTOF和 LC-MS/MS（請見(jiàn)參考文獻）。DetergentOUT™ GB-S10柱子的使用顯著(zhù)增加到了檢測到的肽光譜的數量。除此之外，DetergentOUT™ GB-S10柱子對于去污劑有高度的結合容量，比如每毫升固定的樹(shù)脂可以結合6mg SDS和14mg Triton® X-100。

常見(jiàn)去污劑的選擇：

Table 1:  A comparison of the detergent removal rates and percentage protein recovery with DetergentOUT^™ GBS10.

華雅思創(chuàng )生物—G-Biosciences全國授權代理

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