如何提高蛋白轉印效率

   質(zhì)量差的蛋白轉印在免疫印跡的過(guò)程中會(huì )導致要么比較弱的信號要么沒(méi)有信號. 盡管質(zhì)量差的蛋白轉印時(shí)有發(fā)生，科學(xué)家們通常不把它作為一個(gè)免疫印跡實(shí)驗失敗的原因。因此，當需要排除質(zhì)量差的信號的原因時(shí)轉膜的質(zhì)量好壞需要首先被考慮. 

導致轉膜差的原因

  質(zhì)量差的蛋白轉印可能發(fā)生在抗原水平低的情況下。這種情況的發(fā)生通常是因為要么轉膜步驟差或膠沒(méi)有足夠的裝載. 在實(shí)驗室中，這在免疫印跡中會(huì )作為錯誤發(fā)生從而導致信號的缺失。為了使轉印成功膜需要有更高水平的抗原.也會(huì )有轉印膜自己的問(wèn)題或者操作時(shí)間長(cháng)短，因為蛋白轉印或許需要更長(cháng)時(shí)間取決于實(shí)驗人員使用的產(chǎn)品. 如果一個(gè)蛋白轉印被中斷或者沒(méi)有給與足夠的時(shí)間, 那么轉印或許不能產(chǎn)生足夠強度的信號。 

  另外一個(gè)導致質(zhì)量差轉膜的原因是抗體濃度。如果濃度太高或太低, 那么會(huì )有很少或者沒(méi)有信號的轉移。 你可以分辨出濃度是否太高因為棕色/ 微黃色的條帶會(huì )在膜上出現被捕獲的氣泡會(huì )提供一個(gè)天然屏障對于蛋白轉印，這會(huì )導致膜和轉印的區域是空白的。在真正印跡的過(guò)程中很難識別這些捕獲的氣泡, 這會(huì )導致印跡的失敗而沒(méi)有任何物理的暗示為什么會(huì )失敗。 

阻止和檢測質(zhì)量差的蛋白轉印

  因為蛋白轉印經(jīng)常被忽視, 實(shí)驗室人員或許想要整合蛋白確認的過(guò)程. 蛋白轉印可以通過(guò)使用反向染色來(lái)進(jìn)行確認，這會(huì )發(fā)現任何特定性的問(wèn)題比如大氣泡這些氣泡會(huì )阻止某些區域不能得到轉印。

  有很少的方法可以解決氣泡問(wèn)題. 反而，較好的方法是檢測印跡來(lái)看是否有氣泡。不進(jìn)行染色的話(huà)， 大大部分氣泡不會(huì )被注意到從而導致最終信號的缺失。

  除了染色的方法之外，也有其他的產(chǎn)品，比如 Swift Transfer Pads, 它可以用于降低必要的蛋白的轉膜時(shí)間阻止潛在的問(wèn)題發(fā)生，比如過(guò)熱. 他會(huì )降低蛋白轉膜不*的比率。Swift Transfer Pads可以用于任何類(lèi)型的蛋白，但是對于特別高分子量的蛋白轉膜很有幫助。有高分子量的蛋白或許需要更長(cháng)的轉膜時(shí)間同時(shí)有很大的可能得到質(zhì)量差的轉膜結果。低分子量的蛋白將更加容易的通過(guò)膜孔徑。

實(shí)驗人員或許使用包含20%甲醇的轉膜緩沖液來(lái)進(jìn)一步協(xié)助轉膜。如果轉膜持續失敗，那么操作的時(shí)間本身會(huì )有一些問(wèn)題。

  質(zhì)量差的蛋白轉膜如果使用正確的技術(shù)可以相對容易找到問(wèn)題并解決它。G-Biosciences有一系列的產(chǎn)品可以為科研人員在轉膜和免疫印跡過(guò)程中提供更好的準確性和操作速度。通過(guò)保證合適的蛋白轉膜，很多實(shí)驗室可以顯著(zhù)降低浪費在印跡和troubleshooting印跡結果上的時(shí)間。

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