對照樣品在免疫印跡中的作用

  對照樣品在免疫印跡結果的判定上起著(zhù)非常重要的作用。對照樣品是使用抗體來(lái)檢測樣品中的蛋白。當使用免疫印跡來(lái)決定某個(gè)樣品中蛋白表達的水平時(shí)，上對照樣是用來(lái)保證結果不是由于上樣問(wèn)題或者蛋白轉印的錯誤。當使用上樣對照時(shí)，正確類(lèi)型的對照首先需要選擇出來(lái)。

上對照樣品的好處

  上對照樣品，有很多好處，通常來(lái)說(shuō)關(guān)于質(zhì)量。沒(méi)有一個(gè)上樣對照，免疫印跡的結果不能發(fā)布因為不能足夠的證實(shí)。因為這樣，上對照樣對于那些想要發(fā)表的研究來(lái)說(shuō)非常重要。當有一個(gè)上樣對照的時(shí)候，常見(jiàn)的錯誤比如轉印失敗會(huì )變得非常突出。這減少了花在那些不能使人信服的或不正確的結果上的時(shí)間。

進(jìn)一步講，類(lèi)似于邊緣效應的問(wèn)題 -- 當蛋白從外部的泳道向中心漂移 -- 可以排除通過(guò)使用上樣對照，優(yōu)化調整整個(gè)印跡過(guò)程，上樣對照可以用來(lái)進(jìn)一步減低不規則蛋白表達水平的影響。在任何情況下蛋白會(huì )被要么上樣或者轉印錯誤所影響，上對照樣就顯得尤為重要.

常用的上樣對照

  有幾種主流類(lèi)型的上樣對照. 取決于免疫印跡本身，任何這些蛋白或者是理想的選擇. 如下是常用的上樣對照。

· Actin. Actin是對于全細胞和細胞質(zhì)抽提的應用來(lái)說(shuō)是理想的選擇。有各種形式可供選擇, Actin是極其多用途的上樣對照。Actin不能用于骨骼肌肉樣品，因為它是肌肉活動(dòng)的主要組分。

· GAPDH. 甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)是另外一個(gè)全細胞和細胞質(zhì)抽提上樣對照. 通過(guò)打斷葡萄糖和碳分子，GAPDH作為糖酵解催化劑.    

· Porin. Porin對于線(xiàn)粒體蛋白來(lái)說(shuō)是一個(gè)理想的上樣對照. Porin是一個(gè)電壓依賴(lài)性的陰離子選擇通道蛋白, 在很多組織中都得到了發(fā)現。  

· Lamin B1. 主要適用于核蛋白膜，Lamin B1 理論上人為主要負責細胞內細胞核一些元素的穩定. Lamin B1不應該作為上樣對照當沒(méi)有核膜的時(shí)候。

· TBP. TATA 結合蛋白 (TBP)是另外一個(gè)核蛋白的上樣對照. 它是一個(gè)轉錄結合蛋白, TBP 直接和RNA聚合酶II一起發(fā)揮作用在DNA定序中被發(fā)現。  

除了有不同類(lèi)型的上樣對照，而且上樣對照也有不同的產(chǎn)品形式，包括沒(méi)有偶聯(lián)或偶聯(lián)特定的標記, 酶或者染料用于簡(jiǎn)單的檢測.

使用上樣對照的缺點(diǎn)

  由于涉及到許多準確性的檢查，一個(gè)上樣對照會(huì )增加每次免疫印跡的成本和時(shí)間。不管這是否有價(jià)值這都取決于實(shí)驗室的應用以及他們的需求。因為上樣對照必須要購買(mǎi)，使用上樣對照的準確成本取決于這個(gè)上樣對照哪里采購以及采購成本。進(jìn)一步講，針對某個(gè)特定的應用使用錯誤的上樣對照會(huì )導致一些準確性和結果產(chǎn)生的相關(guān)問(wèn)題。盡管如此，上樣對照是得到可靠檢測的要求。

那些不熟悉使用上樣對照的實(shí)驗室或許需要首先了解他們實(shí)驗室的需求， -- 以及對于他們來(lái)說(shuō)合適的上樣對照。

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