點(diǎn)滴透析綜述

點(diǎn)滴透析的定義：

    DNA溶液制備以后，在操作過(guò)程使用的酶或許被使用的化學(xué)品的殘留多影響。這或許包括過(guò)量的鹽，SDS, 或者其他抑制物質(zhì)。為了恰當的使用DNA制備液的結果, 有時(shí)需要進(jìn)行點(diǎn)滴透析。理想情況下，點(diǎn)滴透析能夠漂洗酶，去除殘留，提供更好和更加準確地結果。

點(diǎn)滴透析的過(guò)程：

  在點(diǎn)滴透析的過(guò)程中，緩沖液加到燒杯，培養板，或其他容器中。常用的緩沖液是雙蒸水。 一個(gè)VS型膜放到緩沖液上面并且光面朝上，這個(gè)濾膜會(huì )被*飽和，這個(gè)過(guò)程大概持續5分鐘。同時(shí)，很重要看下濾膜是否有氣泡，這些氣泡會(huì )在濾膜和緩沖液之間。DNA通過(guò)移液器緩慢滴落到濾膜的中心處。如果DNA保持在濾膜的中間，整個(gè)的測試樣品可以放在上面。如果DNA發(fā)生了移動(dòng)，那么這個(gè)DNA不適合透析。DNA不會(huì )保持在濾膜的中心或許需要一個(gè)額外的酒精沉淀步驟。

這個(gè)容器然后蓋上約1-4個(gè)小時(shí)。等待合適的時(shí)間之后，DNA使用另外一個(gè)移液器進(jìn)行重新收集，然后放入一個(gè)微量離心管中，用緩沖液將膜進(jìn)行漂洗。分光光度計或瓊脂糖凝膠電泳用來(lái)估計DNA的濃度。這時(shí)，有可能影響DNA分析結果的化學(xué)物質(zhì)應該被去除。 

盡管點(diǎn)滴透析可以通過(guò)其他緩沖液來(lái)進(jìn)行操作，通常來(lái)說(shuō)推薦雙蒸水。點(diǎn)滴透析的過(guò)程也可以使用一個(gè)樣本進(jìn)行重復如果你發(fā)現仍然有沒(méi)有必要的殘留或污染物的話(huà). 當重復點(diǎn)滴透析的過(guò)程時(shí)，使用新鮮的緩沖液和新的濾膜很重要 -- 然而樣品可以需要操作所需要的額外時(shí)間. 

點(diǎn)滴透析的難點(diǎn)：

  點(diǎn)滴透析需要具備一定手工操作水平的熟練性, 因為它不像化學(xué)反應這么簡(jiǎn)單 -- 它需要操作人員能夠將濾膜正確的放置，并且能夠準確地將DNA滴到膜上. 如果DNA沒(méi)有準確地滴到濾膜中心或者濾膜丟失, 這個(gè)過(guò)程或許需要重新開(kāi)始. 進(jìn)一步來(lái)說(shuō)，濾膜或許會(huì )翻轉。

  因為濾膜會(huì )在緩沖液上不可預測的移動(dòng), 強烈推薦操作人員先模擬整個(gè)操作過(guò)程在用真實(shí)的樣品操作之前。一旦這個(gè)過(guò)程被掌握后，就比較簡(jiǎn)單了，只要你理解了各個(gè)組分如何整體產(chǎn)生效果。新手進(jìn)行操作時(shí)需要緩慢的加DNA, 這樣當組分發(fā)生突然移動(dòng)時(shí)可以做出反應。

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