細胞培養基的質(zhì)量標準和檢測方法

　　細胞培養基的質(zhì)量標準和檢測方法：

　　澄清度

　　水是細胞培養基的溶劑。細胞培養基中的營(yíng)養成分只有*溶解于水才能被細胞吸收攝取，細胞才能生長(cháng)增殖，因此細胞培養基是否溶解以及培養液是否透明澄清直接影響培養基使用。該項目是通過(guò)對水溶解后的細胞培養基的澄清度檢查，判斷細胞培養基的澄清度。 按中華人民共和國藥典2005年版二部附錄Ⅸ B進(jìn)行。

　　pH 值

　　哺乳類(lèi)動(dòng)物細胞生長(cháng)需要合適的酸堿度，pH過(guò)高或者過(guò)低都會(huì )導致細胞死亡。pH值的測定也可以檢查細胞培養基的批間差。清大天一標準規定取規定量供試品，用注射用水（水溫20℃-30℃）溶解至1L，加入規定量碳酸氫鈉到上述溶液中，用與細胞培養基溶液pH值相近的兩點(diǎn)標準緩沖液校準后的酸度計進(jìn)行測定。按中華人民共和國藥典2005年版二部附錄Ⅵ H進(jìn)行；加入規定量的碳酸氫鈉到上述溶液中，按中華人民共和國藥典2005年版二部附錄Ⅵ H進(jìn)行

　　干燥減量的質(zhì)量分數

　　細胞培養基具有吸濕性，在空氣中放置水分會(huì )很快升高，干燥減量的質(zhì)量分數表示產(chǎn)品中含濕量。細胞培養基是有菌制劑，其豐富的營(yíng)養成分有利于微生物生長(cháng)，控制細胞培養基中的水分可以防止微生物的繁殖，保持細胞培養基的養分。按中華人民共和國藥典2005 年版二部附錄Ⅷ L 干燥失重測定法進(jìn)行。

　　滲透壓

　　溶劑通過(guò)半透膜由低濃度向高濃度溶液擴散的現象稱(chēng)為滲透，阻止滲透所需施加的壓力，稱(chēng)為滲透壓。細胞必須生活在等滲環(huán)境中，動(dòng)物細胞借助K＋、Na＋維持滲透平衡。大多數細胞對滲透壓有一定的耐受性。但是培養液滲透壓過(guò)高容易使細胞脫水wei縮，培養液滲透壓過(guò)低容易使細胞膨脹破裂，因此要控制培養基的滲透壓范圍。按中華人民共和國藥典2005 年版二部附錄Ⅸ G 滲透壓摩爾濃度測定法進(jìn)行。

　　細菌內毒素

　　細菌內毒素是許多病原性細菌所產(chǎn)生的毒素。它的特殊性在于不是細菌或細菌的代謝產(chǎn)物，而是細菌死亡或解體后才釋放出來(lái)的一種具有生物活性的物質(zhì)。培養基細菌內毒素過(guò)高，對生物制品疫苗（如狂犬、乙肝疫苗）、基因工程藥品等注射用的藥品都需要檢查細菌內毒素。 因此本項目的檢驗符合生物制品質(zhì)量控制要求。常規細胞培養基的細菌內毒素標準定為＜10 EU/ml。稱(chēng)取本品規定量（見(jiàn)表4-12）的1/100，加入細菌內毒素檢查用水10 mL溶解，吸取該溶液0.1 mL加細菌內毒素檢查用水3.9 mL，混勻即得試樣。按中華人民共和國藥典2005 年版二部附錄Ⅺ E 細菌內毒素檢查法中的凝膠法進(jìn)行。

　　微生物限度

　　細胞培養基不是無(wú)菌產(chǎn)品，其中的微生物在一定條件下會(huì )吸收細胞培養基中的營(yíng)養物質(zhì)滋生繁殖，導致細胞培養基變質(zhì)失效?？刂萍毎囵B基中細菌和霉菌，是延長(cháng)細胞培養基有效期的方法之一。清大天一在參考《中華人民共和國藥典》2005版二部附錄第100頁(yè)的口服給藥制劑的微生物限度標準，并嚴于該標準，規定細胞培養基產(chǎn)品的細菌數每1g不得超過(guò)200個(gè)，霉菌數每1g不得超過(guò)50個(gè)。

　　稱(chēng)取樣品1 g，加入無(wú)菌純化水10 mL溶解，混勻即得試樣。按中華人民共和國藥典2005年版二部附錄Ⅺ J 微生物限度檢查法進(jìn)行，檢查項目為細菌數、霉菌數。檢查法采用平皿法。

　　細胞生長(cháng)試驗

　　這是一個(gè)性能特性表述的要求。細胞培養基的功能就是培養哺乳類(lèi)動(dòng)物細胞，因此經(jīng)過(guò)細胞培養效果的檢驗是產(chǎn)品質(zhì)量?jì)?yōu)劣的直觀(guān)表述，這也是很多生物制藥用戶(hù)要求的一項指標。目前國內尚無(wú)細胞培養和計數的法定方法，可參考《體外培養的原理與技術(shù)》中細胞計數fa論述的內容給出。按產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)配制培養液進(jìn)行細胞培養，前四天用含10％小牛血清的培養液培養，觀(guān)察細胞形態(tài)并計數，檢查細胞培養基是否有促生長(cháng)的能力。后三天用不含小牛血清的培養液維持培養，觀(guān)察細胞形態(tài)并計數，檢查細胞培養基中是否有不利細胞生長(cháng)的毒素。本試驗用細胞為VERO細胞。

　　細胞培養液的儲存，細胞培養液的儲存條件一般為2－8℃、密閉、避光保存，但要注意如下幾點(diǎn)：

　　1） 過(guò)濾后的*培養液，即添加了血清、谷氨酰胺、抗生素等的培養液要盡快使用，一般在2－3周內使用完。培養液中的L-谷氨酰胺是不穩定的，不同溫度L－谷氨酰胺的降解。

　　2） 滅菌后的未加L-谷氨酰胺等添加劑的培養基溶液，一般可在4℃保存6～9個(gè)月，也可冷凍保存，用時(shí)解凍

　　3） 高壓除菌后的培養基應置4℃保存，不能因為其可耐受高溫而忽略?xún)Υ鏈囟取?/div>