常見(jiàn)細胞轉染技術(shù)及原理

常見(jiàn)細胞轉染技術(shù)及原理

常規轉染技術(shù)可分為兩大類(lèi)，一類(lèi)是瞬時(shí)轉染，一類(lèi)是穩定轉染。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，因此一個(gè)宿主細胞中可存在多個(gè)拷貝數，產(chǎn)生高水平的表達，但通常只持續幾天，多用于啟動(dòng)子和其它調控元件的分析。一般來(lái)說(shuō)，超螺旋質(zhì)粒DNA轉染效率較高，在轉染后24-72小時(shí)內（依賴(lài)于各種不同的構建)分析結果，常常用到一些報告系統如熒光蛋白，β半乳糖苷酶等來(lái)幫助檢測。后者也稱(chēng)穩定轉染，外源DNA 既可以整合到宿主染色體中，也可能作為一種游離體（episome)存在。盡管線(xiàn)性 DNA比超螺旋DNA轉入量低但整合率高。外源DNA整合到染色體中概率很小，大約1/104轉染細胞能整合，通常需要通過(guò)一些選擇性標記，如來(lái)氨丙基轉移酶

今天小編帶大家了解一下不同細胞轉染技術(shù)的原理：

除上述傳統方法外，近年來(lái)國際上推出了一些陽(yáng)離子聚合物基因轉染技術(shù)，以其適用宿主范圍廣，操作簡(jiǎn)便對細胞毒性小,轉染效率高受到研究者們的青睞。其中樹(shù)枝狀聚合物(Dendrimers)和聚乙烯亞胺(Polyethylenimine，PEI)的轉染性能最佳，但樹(shù)枝狀聚合物的結構不易于進(jìn)一步改性，且其合成工藝復雜。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽(yáng)離子電荷密度的有機大分子，每相隔二個(gè)碳個(gè)原子，即每“第三個(gè)原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子，使得聚合物網(wǎng)絡(luò )在任何pH下都能充當有效的“質(zhì)子海綿"(proton sponge)體。這種聚陽(yáng)離子能將各種報告基因轉入各種種屬細胞，其效果好于脂質(zhì)聚酰胺，經(jīng)進(jìn)一步的改性后，其轉染性能好于樹(shù)枝狀聚合物，而且它的細胞毒性低。大量實(shí)驗證明，PEI是非常有希望的基因治療載體。目前在設計更復雜的基因載體時(shí)，PEI經(jīng)常做為核心組成成分。

線(xiàn)型.PEI(Line PEI,LPEI)與其衍生物用作基因轉染載體的研究比分枝狀PEI(Branched PEI,BPEI）要早一些，過(guò)去的研究認為在不考慮具體條件，LPEI/DNA轉染復合物的細胞毒性較低，有利于細胞定位，因此與BPEI相比應該轉染效率高一些。但最近研究表明BPEI的分枝度高有利于形成小的轉染復合物，從而提高轉染效率，但同時(shí)細胞毒性也增大。超高分枝的、較柔性的PEI衍生物含有額外的仲胺基和叔胺基，在染實(shí)驗中發(fā)現這種PEI的毒性低,但轉染效率卻較高。