pcr試劑盒操作步驟及注意事項

更新時(shí)間：2022-02-18

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　　PCR試劑盒操作步驟:

　　(1)其中引物與模板的正確結合是關(guān)鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區，其特異性程度就更高。

　　(2) 靈敏度高

　　PCR產(chǎn)物的生成量是以指數方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細胞中檢出一個(gè)靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個(gè)RFU(空斑形成單位)；在細菌學(xué)中小檢出率為3個(gè)細菌。

　　(3) 簡(jiǎn)便、快速

　　PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應，一般在2～4 小時(shí)完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無(wú)放射性污染、易推廣。

　　(4) 對標本的純度要求低

　　不需要分離病毒或細菌及培養細胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板?？芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。

　　PCR試劑盒注意事項：

　?、偌尤朐噭┑捻樞驊恢?，以保證所有反應板孔溫育的時(shí)間一樣。

　?、谑褂酶蓛舻乃芰先萜髋渲孟礈煲?。

　?、郯凑针u血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)中標明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

　?、艿孜顰應揮發(fā)，避免長(cháng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對光敏感，避免長(cháng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗完成后應立即讀取OD值。

　?、菹礈烀笜税鍟r(shí)應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

　?、奘褂靡淮涡缘奈^以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。

　?、邔?shí)驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。