大腸桿菌蛋白表達感受態(tài)細胞的制備

感受態(tài)，是指宿主細胞最容易接受外源基因并實(shí)現將其轉化的一種生理狀態(tài)，它是由受體菌的遺傳性狀所決定的，同時(shí)也受菌齡以及外界環(huán)境因子的影響， 比如Ca²⁺就可以大大促進(jìn)轉化的作用。細胞的感受態(tài)一般出現在對數生長(cháng)期，新鮮幼嫩的細胞是制備感受態(tài)細胞和進(jìn)行成功轉化的關(guān)鍵。

LB培養基（固體、液體）：Tryptone 1.00g，Yeast 0.50g，NaCl 1.00g，定容至100ml。（固體培養基加入1.5%的瓊脂）

抗性：卡那霉素，氨卞青霉素，氯霉素，四環(huán)素。

• ?。?0℃凍存的感受態(tài)菌株，用接種環(huán)劃線(xiàn)分離接種于固體平板上（平板抗性根據感受態(tài)選擇），做好標記，倒置于37℃培養箱培養過(guò)夜。
• 第二天，從平板上挑取單個(gè)菌落，接種至含有4ml LB培養液（抗性根據感受態(tài)選擇）的試管中，37℃,195rpm，震蕩培養過(guò)夜。次日取菌液4ml接種至含有400ml LB培養基（抗性根據感受態(tài)選擇）的2L搖瓶中，37℃，200rpm震蕩培養約2-3小時(shí)。
• 當菌落OD600nm值達到0.3－0.5時(shí)，將搖瓶取出放置于冰上10-15min。在無(wú)菌條件下把菌液倒入500ml的預冷的離心管中，離心4℃,3000r，8min。
• 棄去上清，加入約200ml的預冷的CaCl2溶液，吹打混勻，懸浮菌體，放入冰浴30min。
• 離心4℃,3000r，8min，棄去上清，加入約8ml預冷的CaCl2溶液，重新懸浮菌體。
• 將用CaCl2溶液處理后的菌體分裝于1.5ml的EP管中，每管110ul，保存于-80℃的超低溫冰箱中。