本試劑盒提供全套試劑,適用于從各種哺乳動(dòng)物細胞(原代或傳代細胞、貼壁或懸浮細胞等)和各種實(shí)體軟組織(如腦、脊髓、神經(jīng)結或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結締組織)提取總蛋白。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便,無(wú)須超速離心機。本試劑盒含有的du特變性劑能夠溶解細胞膜包括細胞質(zhì)膜和核膜。提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫共沉淀等蛋白研究。
使用方法:
A. 細胞總蛋白提取
1. 每500 μl裂解液,在使用前數分鐘內加入5 μl PMSF,使PMSF的最終濃度為1mM。
2. 取5-10×106個(gè)細胞,在4℃,500 g條件下離心5-10分鐘,小心吸取培養基,盡可能吸干,收集細胞。
3. 用冷PBS洗滌細胞兩次,每次洗滌后盡可能吸干上清。
4. 每5×106個(gè)細胞中加入500 μl冷的裂解液,混勻后,在4℃條件下振蕩15-20分鐘。
5. 在4℃,16,000 g條件下離心15分鐘。
6. 快速將上清轉移至另一預冷的干凈離心管,即可得到總蛋白。
B. 組織總蛋白提取
1. 每500 μl裂解液,在使用前數分鐘內加入5 μl PMSF,使PMSF的最終濃度為1mM。
2. 取100 mg組織樣本剪碎,加入裂解液,用組織勻漿器勻漿至無(wú)明顯肉眼可見(jiàn)固體。
3. 將組織勻漿吸入另一預冷的干凈離心管中,在4℃,16000 g條件下離心5分鐘。
4. 快速將上清轉移至另一預冷的干凈離心管,即可得到總蛋白。
上述蛋白提取物可立即用于后續實(shí)驗,或分裝后于-80℃冰箱保存備用。
注意事項:1. 實(shí)驗過(guò)程中的所有試劑可冰上預冷;所有器具須放-20℃冰箱預冷。
2. 整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫狀態(tài)。
3. 蛋白濃度用BCA法測定 。
以上就是蛋白提取試劑盒的使用方法,以上知識僅供參考,希望對您有所幫助!