晶欣生物 重組人纖粘連蛋白片段GX100A 轉染

晶欣生物 重組人纖粘連蛋白片段GX100A 轉染    產(chǎn)品貨號：GX100A

產(chǎn)品品牌：晶欣生物

產(chǎn)品規格：0.5mg

存儲條件：-20℃。

注意事項：（1）最多可凍融10次。

         （2）不要劇烈混合溶液，不要渦旋。

產(chǎn)品組分：重組人纖粘連蛋白 0.5mg，該試劑以1 mg/ml 溶液形式提供?！竞?2.5 mM檸檬酸鈉(pH 6.2)和1.25%蔗糖的無(wú)菌溶液?！?/span>

產(chǎn)品介紹：該重組人纖維連接片段（rFN-CH-296），由三個(gè)功能結構域組成：細胞結合域 、肝磷脂結合域和CS1位點(diǎn)。該片段通過(guò)協(xié)助靶細胞和病毒粒子的共定位來(lái)增強逆轉錄病毒介導的基因轉導。其作用原理是：逆轉錄病毒載體與肝磷脂結合域結合，細胞表面VLA-5及 VLA-4分別與該纖連蛋白的細胞結合域 和 CS-1位點(diǎn)結合。在經(jīng)重組人纖粘連蛋白片段包被的培養容器表面，細胞與病毒載體高濃度共存，從而提高基因感染效率。

需要準備設備：

1.未經(jīng)處理的組織培養板或培養皿

2.電動(dòng)移液器

3.移液器

4.無(wú)菌移液器

5.帶濾芯的無(wú)菌吸頭

6.生物安全柜或超凈工作站

7.顯微鏡

8.二氧化碳培養箱

9.微孔板離心機

10.試劑：

無(wú)菌PBS(-)

HBSS/Hepes (Hank's Balanced Salt溶液，添加2.5% (v/v)1 M Hepes)

2%牛血清白蛋白(BSA Fraction V) /PBS 溶液

實(shí)驗方案：

1.重組人纖粘連蛋白片段包被培養板的制備

將重組人纖粘連蛋白片段包被于培養板上，濃度20-100μg/ml的重組人纖粘連蛋白片段可達到4-20μg/cm²的包被密度。

（1）包被前，用無(wú)菌PBS將該溶液稀釋至20-100μg/ml?！菊執崆坝嬎阒亟M人纖粘連蛋白試劑的用量，如：2.25ml濃度為20μg/ml的重組人纖粘連蛋白溶液放入直徑為35mm的培養皿（9cm²）中時(shí)，用于包被的密度為5μg/cm²】

注意：為避免重組人纖粘連蛋白片段丟失，請勿將PBS稀釋的重組人纖粘連蛋白溶液過(guò)濾除菌。

（2）將適當體積（24孔板中每孔0.5 ml，或6孔板每孔2 ml。）的無(wú)菌重組人纖粘連蛋白溶液分配到每個(gè)板中，讓板在室溫下靜置2小時(shí)或在4℃過(guò)夜。

注意:在此步驟中應使用未經(jīng)處理的細胞培養級組織培養板或培養皿。

（3）移除重組人纖粘連蛋白溶液，然后用適量含無(wú)菌2%牛血清白蛋白(BSA，Fraction V)的PBS溶液進(jìn)行封閉（24孔板中每孔0.5 ml，或6孔板每孔2 ml），讓板在室溫下靜置30分鐘。

（4）移除BSA溶液，用適當體積的HBSS/Hepes或PBS清洗一次。除去洗滌液后，即可使用。重組人纖粘連蛋白片段包被板可用封板膜密封，并在4℃下儲存—周。

2.基因轉導

使用重組人纖粘連蛋白試劑進(jìn)行基因轉導的方法有兩種：重組人纖粘連蛋白結合病毒感染法(A方法)和上清液感染法(B方法)。在A方法中，逆轉錄病毒顆粒首先結合到涂有重組人纖粘連蛋白試劑的板上，去除病毒上清液后加入靶細胞。在B方法中，將病毒溶液和靶細胞混合，然后添加到重組人纖粘連蛋白片段包被板中。

如果病毒溶液未經(jīng)純化直接用于病毒感染，可能會(huì )因為污染導致基因轉導效率降低。在這種情況下，推薦使用A方法，通過(guò)將病毒與重組人纖粘連蛋白試劑結合并去除上清液來(lái)去除抑制物。 

注意: 本產(chǎn)品僅用于研究，不可用于治療或診斷。此外，請切勿將本產(chǎn)品用作食物、化妝品或家庭用品等。

晶欣生物 重組人纖粘連蛋白片段GX100A 轉染    產(chǎn)品貨號：GX100A

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